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免疫荧光共定位参数_免疫荧光共定位步骤

作者:hacker发布时间:2022-07-11分类:黑客教程浏览:134评论:5


导读:导航:1、imageproplus分析免疫荧光共定位2、如何证实细胞膜上两个蛋白的位置关系3、共定位(免疫荧光)是什么?4、如何分析细胞免疫荧光的结果,能否...

导航:

image pro plus分析免疫荧光共定位

曲轴位置传感器的作用就是确定曲轴的位置,也就是曲轴的转角。它通常要配合凸轮轴位置传感器一起来工作--确定基本点火时刻。我们都知道,发动机是在压缩冲程末开始点火的,那么发动机电脑是怎么知道哪缸该点火了呢?就是通过曲轴位置传感器和凸轮轴位置传感器的信号来计算的,通过曲轴位置传感器,可以知道哪缸活塞处于上止点,通过凸轮轴位置传感器,可以知道哪缸活塞是在压缩冲程中。这样,发动机电脑知道了该什么时候给哪缸点火了。

如何证实细胞膜上两个蛋白的位置关系

证实两个蛋白在细胞膜上都有定位有许多种方法:

1,荧光报告基因:两个蛋白各自用荧光蛋白标记,比如GFP和RFP等,两者荧光光谱不可重叠,在共聚焦显微镜下在各自通道观察和merge后的图像分析,可见荧光重叠,即可证明共定位。

2,免疫荧光:要求两个蛋白都有抗体,或者带有不同的标签,如myc,flag等,然后用免疫组织化学的方法,做免疫荧光二抗双标,在共聚焦显微镜下,可以看到荧光共定位。

3,免疫电镜,同免疫荧光类似,二抗要用不同大小的胶体金标记的二抗,电镜下可以分辨是否共定位。

4,western:提取质膜后,用相应的抗体检测是否在质膜组分中可以同时检测到两种蛋白。

共定位(免疫荧光)是什么?

免疫荧光可以用于共定位,但也可以用于很多其他应用。共定位不能够说是免疫荧光的主要用途。

一楼回答有助于理解共定位,但是“加上红色/绿色荧光蛋白的标签”这种说法并不是免疫荧光的做法。在免疫荧光中,与目标蛋白相结合的是带有荧光分子基团的抗体,此种抗体虽然发荧光,但不称为荧光蛋白。

另外,共定位不能够用于证明相互作用,更不可能证明蛋白之间的共价结合。

共定位就如字面意思上所说的,只能够表明蛋白A和B都在此细胞有表达,并且在同样的细胞内位置/细胞器。

就好像你用GPS看到,有两个人A和B此时都在某市同一家咖啡厅内,并不能够证明他们在幽会。但是如果说因为同时在一处这个事实而怀疑有奸情,也并不全是毫无道理,只是需要别的手段来证明罢了。

如何分析细胞免疫荧光的结果,能否区分是在膜上,还是在胞浆。

你染荧光的时候肯定会染表征细胞核的DAPI吧,你拿电脑进行merge,如果你染出来的结果是只在DAPI(蓝色)外面有一圈,那就是细胞膜定位。如果染出来在DAPI周围到处都是,那就是包浆定位;如果染出来和DAPI是完全merge的,那就是细胞核定位。

至于定量和半定量可以通过软件分析荧光强度,这个不麻烦。半定量应该也可以跑蛋白胶,但是没试过

一般在共定位中用到免疫荧光,“共定位”是什么?

共定位的定义:

共定位是对样品内两种荧光标记的信号共同分布的位置进行分析。 共定位就如字面意思上所说的,只能够表明蛋白A和B都在此细胞有表达,并且在同样的细胞内位置/细胞器。

相关短语:

共定位通道 PDM Channel

细胞共定位 Cellular co localization

细胞内共定位信息 cellular co-localization

共深度点定位 CDP positioning

共表达和同定位 Co-expressed And Co-localized

双语例句:

而在哺乳动物中,黏着素与CTCF隔离子蛋白共定位,并以依赖于CTCF的方式调控转录。

Finally, in mammals, cohesin co localizes with the CTCF insulator protein and controls gene expression in a CTCFdependent manner.

然后后来发现非活性形式AKT主要存在于胞质溶胶中,因此AKT2似乎不大可能与APPL蛋白共定位于内涵体。

However, AKT in this form mainly exists in cytoplasm. Therefore, it is not as possible as beforethat AKT2 could locates in endosomes with APPL proteins

免疫荧光共定位染色法检测突变蛋白在内质网和高尔基体内分布。

Immunofluorescence co-localization analysis was used to examine the synthesis and secretion of the mutant protein.

共定位免疫荧光一定要control probe吗

共定位程度应该是说分析两种荧光共定位的相关性系数,把共定位量化。细胞内蛋白有些基本完全共定位,有些可能只有部分共定位,因此应该有一个标准来量化这种共定位程度。

标签:免疫荧光共定位参数


已有5位网友发表了看法:

  • 访客

    访客  评论于 2022-07-11 11:07:08  回复

    重叠,即可证明共定位。2,免疫荧光:要求两个蛋白都有抗体,或者带有不同的标签,如myc,flag等,然后用免疫组织化学的方法,做免疫荧光二抗双标,在共聚焦显微镜下

  • 访客

    访客  评论于 2022-07-11 01:23:08  回复

    会染表征细胞核的DAPI吧,你拿电脑进行merge,如果你染出来的结果是只在DAPI(蓝色)外面有一圈,那就是细胞膜定位。如果染出来在DAPI周围到处都是,那就是包浆定位;如果染出来和DAPI是完全merg

  • 访客

    访客  评论于 2022-07-11 06:53:41  回复

    溶胶中,因此AKT2似乎不大可能与APPL蛋白共定位于内涵体。However, AKT in this form mainly exists in cytoplas

  • 访客

    访客  评论于 2022-07-11 07:13:05  回复

    取质膜后,用相应的抗体检测是否在质膜组分中可以同时检测到两种蛋白。共定位(免疫荧光)是什么?免疫荧光可以用于共定位,但也可以用于很多其他应用。共定位不能够说是免疫荧光的主要用途。一楼回答有助于理解共定位,但是“加上红色/绿色荧光蛋白的标签”这种说法并不是

  • 访客

    访客  评论于 2022-07-11 04:09:44  回复

    zed双语例句:而在哺乳动物中,黏着素与CTCF隔离子蛋白共定位,并以依赖于CTCF的方式调控转录。Finally, in mammals, cohesin co localizes with the CTCF insulator protein and controls gene ex

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