找人类的小鼠突变位点_基因敲入小鼠

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• 1、怎么查找某基因的最全的已知突变
• 2、如何找到小鼠和人类p53基因的序列
• 3、如何发现基因突变位点啊？

怎么查找某基因的最全的已知突变

基因突变的研已成为当今生命科学研究的热点之一，检测方法也随之迅速发展。人类细胞癌基因的突变类型已如上所述，对于基因突变的检测，1985以前，利用Southern印迹法，可以筛选出基因的缺失、插入和移码重组等突变形式。对于用该法法不能检测的突变，只能应用复杂费时的DNA序列测定分析法。多聚酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）技术是突变研究中的最重大进展，使基因突变检测技术有了长足的发展，目前几乎所有的基因突变检测的分子诊断技术都是建立于PCR的基础之上，并且由PCR衍生出的新方法不断出现，目前已达二十余种，自动化程度也愈来愈高，分析时间大大缩短，分析结果的准确性也有很大很提高。其中包括单链构象多态性（single-strand comformational polymorphism,SSCP）和异源双链分析法（heteroduplex analysis,HA）。下面分别介绍几种PCR衍生技术及经典突变检测方法，可根据检测目的和实验室条件选择时参考。

PCR-SSCP法 PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上，短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象，一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。其基本原理为单链DNA在中性条件下会形成二级结构，这种二级结构依赖于其碱基组成，即使一个碱基的不同，也会形成不同的二级结构而出刺同的迁移率。由于该法简单快速，因而被广泛用于未知基因突变的检测。用PCR-SSCP法检测小于200bp的PCR产物时，突变检出率可达70％-95％，片段大于400bp时，检出率仅为50％左右，该法可能会存在1％的假阳性率。应用PCR-SSCP法应注意电泳的最佳条件，一般突变类型对检测的灵敏度无大的影响，同时该法不能测定突变的准确位点，还需通过序列分析来确定。

如何找到小鼠和人类p53基因的序列

首先找到小鼠和人类p53基因的序列，然后进ncbi首页，里面靠右的位置popular resources下第一个选项“blast”，打开以后，找“nucleotide blast”。进到那个页面有个框就是让你输序列的，如果要比对两个序列的话，要勾选下面的一个小的单选框“Align two or more sequences ”。就会出现两个框，分别输入人和小鼠的序列。点最下面大大的“blast”按钮，就可以了。

如何发现基因突变位点啊？

可以根据解析出的结构

分析突变是否在蛋白重要的功能位点实验方法克隆得到这个基因，

做定点突变得到你需要的突变基因

在细胞中表达

看蛋白在细胞定位有无变化

做coIP看和蛋白相互作用的蛋白有无变化

如果蛋白是个酶的话

看突变前后催化活性的变化

总之，看具体蛋白制定实验

最后最好做一个转基因的小鼠

把突变的基因转到小鼠中看突变体和野生型的小鼠的不同

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